Эдуард Изотов родился 11 ноября 1936 года в Суражском районе Витебской области Белоруссии в семье военнослужащего. Отец — Константин Иосифович Изотов (1905—1968), мать — Анна Иосифовна Изотова (1918—1998).
В 1954 году Эдуард Изотов поступил на актёрский факультет ВГИКа, который окончил в 1959 году (мастерская В. В. Белокурова).
Дебютом Эдуарда Изотова в кино стала сыгранная им главная роль Чаликова в фильме «В степной тиши» (1959) режиссёра С. А. Казакова.
Самой яркой работой актёра, принёсшей ему всенародную известность и любовь зрителей, оказалась роль Ивана в фильме «Морозко» (1964) режиссёра А. А. Роу.
Ещё около двадцати лет после этой роли Эдуард Изотов активно снимался в кино и работал на дубляже, но в 1983 году случилась беда: вместе с женой, Ириной Ладыженской, он был задержан у кафе «Лира» на Пушкинской площади в центре Москвы при совершении валютной операции — обмене небольшой суммы долларов на рубли (не хватало денег на достройку дачи). В те времена по Уголовному кодексу минимальный срок за «валютные махинации» составлял три года. Несмотря на ходатайства известных актёров — Марины Ладыниной, Олега Стриженова, Людмилы Хитяевой, Николая Рыбникова, Аллы Ларионовой, Татьяны Конюховой, Инги Будкевич, Ларисы Лужиной — Изотов и Ладыженская получили тюремный срок.
